Versuche zur Eignung verschiedener Puffer bei der instrumentellen Besamung der Bienenkönigin (Apis mellifera)

Abstract

Das Ziel dieser Untersuchungen war es, den im allgemeinen bei derinstrumentellen Besamung der Biene verwendeten Trispuffer (TP) gegen einenPhosphatpuffer (PP) nach Sorensen mit erprobten und neuenUntersuchungsmethoden auszutesten. Zusätzlich wurde der Effekt eineseinprozentiger Eidotterzusatzes überprüft. 8-9 Wochen nach der instrumentellen Besamung wurde die Spermatheka derKöniginnen freipräpariert, die Spermienzahl bestimmt und die Spermaqualitätanhand der Motilität, der Integrität der Plasmamembran nach Anwendung desHypoosmotischem Schwelltests und der Vitalitätsfärbung mit demFluoreszenzfarbstoff Bisbenzimid (HOECHST 33258) beurteilt. DerHypoosmotische Schwelltest und der Fluoreszenzfarbstoff Bisbenzimid warenbisher nur an Säugetierspermien erprobt. Bei der Untersuchung des Spermatheka-Inhaltes war der Effekt von Puffer- undEidotterzusatz auf die Anzahl an Spermien und die Anfangsaktivität signifikant.So war die Gesamtzahl bei der Phosphatpuffer-Gruppe höher als bei derTrispuffer-Gruppe [0,881 (2,858) bzw. 0,195 (3,606); g(SF)], der Eidotterzusatzführte jeweils zu einer Erhöhung der Spermienzahl. Die Anfangsaktivität war bei der Trispuffer-Gruppe besser ausgeprägt als beider Phosphatpuffer-Gruppe; der Eidotterzusatz führte zu einer zusätzlichenSteigerung. Für die Motilität ergab sich ein entsprechender Effekt des Puffers.Keine Effekte zeigten sich auf die Anzahl lebender Spermien und den ORW.Die entsprechenden Untersuchungen von Frischsperma ließ keine Effekte derbeiden Variablen erkennen. Bei den Königinnen, die zur Eiablage kamen, erfolgte dies nach Zusatz vonDotter früher (p<0,05) als ohne Zusatz (6,9 bzw. 8,8 Tage bei PP und 6,39 bzw.9,5 Tage bei TP). Bei Erfassung der Brutentwicklung steigerte derEidotterzusatz die Verluste (p<0,0003). Nach 14 Tagen war jedoch keinUnterschied mehr feststellbar. Die Ergebnisse bestätigen die in den Vorversuchen festgestellte gute Eignungvon Phosphatpuffer zur Verwendung bei der instrumentellen Besamung; sieweisen weiterhin auf einen positiven Effekt des Eidotterzusatzes hin. The aim of this investigation was to compare the commonly used Tris buffer(TB) to a phoshate buffer (PB) as described by Sorensen in its suitability forartificial insemination of honey bee queens by applying standard and new testmethods. Furthermore, the effects of a 1% yolk additive to both buffers weretested. 8-9 weeks after insemination, the spermathecae were taken out to investigatethe number of sperms and their quality by assessing their motility, application ofa hypoosmotic swelling test checking the integrity of the plasma membrane andby a vitality staining with the fluorescence dye Bisbenzimid (HOECHST 33258).The hypoosmotic swelling test and the fluorescent staining with Bisbenzimid sofar were only used for mammalian spermatozoa. The effect of buffer and egg yolk was highly significant on the total number ofsperm and their initial motility. The total number was higher with PB comparedto TB [0.881 (2.858 vs. 0.195 (3.606); g(SF)], egg yolk led to an additionalincrease. Initial motility was higher in the case of TB; in both buffers egg yolkagain led to an additional increase. Similar effects of buffer were observed forthe motility. The % live spermatozoa and the ORW were not affected. Whentesting the same parameters with fresh spermatozoa no effect of other variablescould be demonstrated. Egg laying of successfully inseminated queens started earlier when yolk wasadded to the buffers (6.9 vs. 8.8 days in case of PB, 6.3 vs. 9.5 days in case ofTB). Addition of egg yolk increased (p<0.0003) losses during brood development.However after 14 days there were no further differences. In confirmation of preliminary data the obtained results show the suitability ofPB. They further indicate a positive effect of the addition of egg yolk.