Einfluß exogener Faktoren auf die Transkriptionsregulation des Hepatitis B Virus

Abstract

n dieser Arbeit gelang der Nachweis, daß stabil in Hepatozytenlinien exprimiertes Hepatitis B Virus X Protein (HBx) in funktioneller Formexprimiert wird. Hierbei entsprach die Expression des HBx weitestgehend der in chronisch HBV infizierter Leber vorgefundenen Situation.In diesen Zellinien wurde durch UV-Bestrahlung die Expression des Tumorsuppressorproteins p53 aktiviert. Es konnte somit unterweitgehend natürlichen Expressionsbedingungen, sowohl für HBx als auch für p53, gezeigt werden, daß HBx mehrere Funktionen von p53beeinflußt. In stabil HBx exprimierenden AML12 Zellen war HBx in der Lage, einer p53-vermittelten Repression des HBV-Enhancer Ientgegen zu wirken. Des Weiteren konnte gezeigt werden, daß HBx einen Einfluß auf die p53-vermittelte Transkription vonp21waf/cip/sdi-RNS hat. Ein weiterer Gegenstand dieser Arbeit war eine häufig in bestimmten Patientengruppen gefundene 8bp-Deletion der Nukleotide1763-1770 im Bereich des HBV-Enhancer II/Core-Promotors. Hierbei wurde der Einfluß auf das von der 8bp-Deletion betroffene NRRE(nuclear receptor responsible element) bzw. die in diesem Bereich bindenden Transkriptionsfaktoren untersucht. Bei den mit Kernextraktenaus HepG2 Zellen durchgeführten EMSAs, und auch bei anschließend durchgeführter Affinitätsreinigung zeigte sich, daß Oligonukleotidemit der 8bp-Deletion im Vergleich zum Wildtyp weniger Kernproteine banden. Außerdem ergab sich, daß in vitro translatiertes COUP-TF1nur sehr schwach an das wt-NRRE band und keine Bindung von COUP-TF1 an das NRRE mit 8bp-Deletion festzustellen war.