Diffuse großzellige B-Zell-Lymphome (DLBCL) sind aggressive Neoplasien reifer B-Zellen und repräsentieren die häufigsten neu diagnostizierten Lymphome. Genexpressionsanalysen gelang die Differenzierung der heterogenen DLBCL in mindestens zwei vorherrschende molekulare Subtypen, mit einem Expressionsprofil ähnlich dem von Keimzentrums-B-Zellen (GCB DLBCL) oder aktivierten Post-Keimzentrums-B-Zellen (ABC DLBCL). Ein charakteristisches Merkmal der ABC DLBCL ist ihre Abhängigkeit von der konstitutiven Aktivierung des NF κB-Signalwegs. Zudem tragen ca. 40% der ABC DLBCL Fälle einen Hinzugewinn des Chromosomenabschnitts 18q, auf dem u.a. der Transkriptionsfaktor NFATc1 (Nuclear Factor of Activated T cells c1) codiert und dadurch stärker exprimiert wird. Die gesteigerte Expression und Aktivität von NFATc1 konnte bereits mit der Pathogenese verschiedener Tumorerkrankungen in Verbindung gebracht werden. Daher sollte im Rahmen dieser Arbeit am Zellkulturmodell untersucht werden, ob NFATc1 auch an der molekularen Pathogenese der DLBCL beteiligt ist. Bei zwei ABC DLBCL Zelllinien (HBL-1 und TMD8) konnte eine konstitutive Aktivierung von NFATc1 beobachtet werden, die wahrscheinlich durch den chronisch aktiven B-Zell-Rezeptor-Signalweg aufrechterhalten wird. Sowohl die pharmakologische Inhibierung der NFATc1-aktivierenden Phosphatase Calcineurin als auch die shRNA-vermittelte Herunterregulation von NFATc1 hatten auf beide Zelllinien einen selektiven toxischen Effekt. Dieser beruhte auf einer Induktion der Apoptose und bekräftigte somit die Abhängigkeit dieser DLBCL Zelllinien von der NFATc1-Aktivität. Genexpressionsanalysen nach shRNA-vermittelter Herunterregulation von NFATc1 ermöglichten die Identifikation pro- proliferativer und anti-apoptotischer Faktoren, deren Expression durch NFATc1 reguliert wird. Darüber hinaus scheint NFATc1 an der Signalweiterleitung über den NF κB-Signalweg beteiligt zu sein und moduliert die Expression bekannter NF κB-Zielgene. Dies deutet auf eine synergistische Funktion beider Transkriptionsfaktoren bei der Pathogenese der ABC DLBCL. Weiterhin wurde die Phosphorylierung von STAT3, die einigen ABC DLBCL Zelllinien die Eigenversorgung mit autokrinen Wachstumsfaktoren ermöglicht, nach Herunterregulation von NFATc1 inhibiert. Schließlich konnte eine unterdrückte Expression von MHC Klasse II-Molekülen durch NFATc1 beobachtet werden. Sowohl die Herunterregulation von NFATc1 als auch die pharmakologische Inhibierung von Calcineurin mittels Cyclosporin A induzierten die MHC Klasse II- Molekülexpression, was eine Beteiligung von NFATc1 am Entfliehen vor der Erkennung und Eliminierung durch das Immunsystem (Immune Escape) suggeriert. Zusammenfassend weisen die hier gewonnenen Erkenntnisse darauf hin, dass NFATc1 eine unterstützende bzw. onkogene Rolle bei der molekularen Pathogenese einer Subgruppe der DLBCL einnimmt, die therapeutisch genutzt werden könnte.
Diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) is a mature B-cell neoplasm and represents the most frequent lymphoma subtype in adults. Gene expression profiling enabled the differentiation of the heterogeneous diagnostic category into two predominant DLBCL subgroups that arise from distinct stages of B-cell differentiation: the germinal center B-cell-like (GCB) and the activated B -cell-like (ABC) DLBCL. ABC DLBCLs are characterized by a constitutively active NF κB signaling pathway. Furthermore, approximately 40% of all ABC DLBC cases harbor a gain or amplification of the 18q chromosome arm, which causes an enhanced expression of 18q encoded genes like the NFATc1 (Nuclear Factor of Activated T cells c1) transcription factor. The increased expression and activation of NFATc1 were shown to be implicated in the pathogenesis of different types of cancer. Therefore, the aim of this study was to investigate whether NFATc1 is also involved in the molecular pathogenesis of DLBCL using a DLBCL cell culture model. NFATc1 was constitutively active in two ABC DLBCL cell lines (HBL-1 and TMD8) presumably due to the chronic activation of the B -cell-receptor signaling pathway in these cell lines. Both the pharmacological inhibition of the NFATc1-activating phosphatase Calcineurin as well as the shRNA-mediated knockdown of NFATc1 had a selective toxic effect for HBL-1 and TMD8. The toxicity resulted from an increased induction of apoptosis and underlined the addiction of the cell lines to the transcriptionally active NFATc1 protein. Using gene expression profiling upon shRNA-mediated NFATc1 knockdown, pro-proliferative and anti-apoptotic factors were identified to be transcriptionally regulated by NFATc1. Furthermore, NFATc1 was shown to induce the NF κB signaling pathway and the expression of NF κB target genes suggesting a synergistic role for both transcription factors in the pathogenesis of ABC DLBCLs. NFATc1 knockdown resulted in a reduced phosphorylation of STAT3 that is needed for the autonomous supply of autocrine growth and survival factors in some ABC DLBCLs. Finally, NFATc1 was shown to suppress the MHC class II-molecule expression in the ABC DLBCL cell line HBL-1. The knockdown of NFATc1 as well as the inhibition of Calcineurin using Cyclosporin A released the expression of MHC class II-molecules indicating an involvement of NFATc1 in the circumvention of the identification and elimination of the malignant cell by the immune system (immune escape). Taking all into account, the herein made observations suggest a supporting, in particular, an oncogenic role of NFATc1 in the pathogenesis of a subgroup of DLBCLs that might be targeted therapeutically.
